N-乙酰神经氨酸合成途径在枯草芽孢杆菌的构建

对食品安全认可的枯草芽孢杆菌进行菌株改造,利用生物发酵法制备N-乙酰神经氨酸。首先通过基因合成获取来自枯草芽孢杆菌溶源体的Pholin启动子并构建了p MK4-Pholin-GFP质粒,转入枯草芽孢杆菌,以GFP为报告基因,对Pholin及其它常见的强启动子进行了转录效率的比较,然后将优化后的Pholin用于构建N-乙酰神经氨酸表达质粒p MK4-Pholin-neu BC。研究结果显示:Pholin启动子是一种优异的枯草芽孢杆菌组成型强启动子,在利用LB进行发酵培养的实验中,Pholin的转录效率为同样方式构建下的P43启动子的2.62倍。通过N-乙酰神经氨酸表达质粒,可以成功地在枯草芽孢杆菌168菌株中实现N-乙酰神经氨酸的重组生产,摇瓶培养中N-乙酰神经氨酸的产量为0.226 g/L。本文为枯草芽孢杆菌进行N-乙酰神经氨酸的工业化发酵生产奠定了研究基础。

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